本研究基于两项临床试验（ZUMA-7研究与ZUMA-1研究的队列1与2）的安全性分析集中的可评估样本进行分析。ZUMA-7研究的安全性分析集定义为随机接受≥1剂Axi-cel（目标剂量为2×10⁶ CAR-T细胞/kg，最大目标剂量为2×10⁸ CAR-T细胞）或SOC的患者。ZUMA-1研究的安全性分析集定义为所有接受Axi-cel治疗（任何剂量）的患者。ZUMA-7研究的疗效终点包括无事件生存期（EFS）、无进展生存期（PFS）、客观缓解率（ORR）、最佳缓解、缓解持续时间（DOR）以及持续缓解等，安全性终点包括细胞因子释放综合症（CRS）与神经事件（NE）发生率等。

通过qPCR（实时荧光定量聚合酶链式反应）进行抗CD19 CAR-T细胞的药代动力学分析。在CAR-T细胞制备过程中分析Axi-cel产品的T细胞表型与其他属性。采用流式细胞仪CellCarta进行各表型T细胞的检测[中央记忆T细胞（T_CM）、初始T细胞、效应记忆T细胞（T_EM）、终末分化效应记忆（TEMRA）T细胞、CD27⁺ CD28⁺天然CD4 T细胞、CD27⁺ CD28⁺初始CD8 T细胞和CD27⁺ CD28⁺初始T细胞等] ，以各表型T细胞数量占总T细胞数量的百分比计算。使用经过验证的Meso Scale Discovery方法（Medpace）分析了29种血清细胞因子、趋化因子和其他炎症标志物。

图1 CAR-T细胞扩增峰值与持续缓解、缓解后进展、无缓解患者之间的相关性

CAR-T细胞扩增峰值与≥3级NEs显著相关（p=0.0006），发生≥3级NEs患者（n=33）的中位CAR-T细胞峰值是发生＜3级NEs患者（n=129）的2.6倍（图2a）。尽管CAR-T细胞扩增峰值与≥3级CRS无显著相关性（p=0.2040），但发生≥3级CRS患者的中位CAR-T细胞峰值是发生＜3级RCS患者的2倍（图2b）。

图2 CAR-T细胞扩增峰值与发生≥3级或＜3级NEs（a）和CRS（b）之间的相关性

此外，尽管可评估样本量较少（n=45），且检测水平较低，但在CAR-T回输后第3天每μL血液中CAR-T细胞的数量与持续缓解相关（p=0.0439，图3），但与不良事件严重程度无显著相关性（CRS：p=0.48，NE：p=0.56）。

图3 回输后早期（Day 3）CAR-T细胞扩增与持续缓解之间的相关性

Axi-cel产品中的初始T细胞与疗效之间的相关性

初始T细胞占总T细胞的百分比水平（以下简称初始T细胞百分比）与疗效指标呈正相关。与缓解后进展和无缓解的患者相比，持续缓解的患者的初始T细胞百分比水平升高（p=0.0408，图4）。与此同时，初始T细胞百分比水平与EFS的改善显著相关，无论初始T细胞百分比＞中位值或≤中位值，Axi-cel治疗的EFS改善程度均优于SOC（p＜0.0001，图5）。

图5 基于初始T细胞百分比中位值（>中位值 vs ≤中位值）和治疗方案（Axi-cel vs SOC）进行EFS的分层分析

此外，在CAR-T回输后第3天每μL血液中CAR-T细胞的数量与产品初始T细胞百分比增加显著相关（p=0.0488，图7）。

图7 产品初始T细胞百分比与Axi-cel回输后Day 3血液样本中CAR-T细胞数量之间的相关性

Axi-cel血清药效学特征与临床结局的相关性

29种血清炎症与免疫调节生物标志物的分析结果显示，大多数生物标志物水平在Ax-cel回输后迅速短暂升高，在7天内达到峰值水平，并在输注后第4周恢复至基线水平（图8）。需要注意的是，白细胞介素-15（IL-15）与单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）水平可在CAR-T细胞回输前清淋预处理后升高。

图8 血清生物标志物与≥3级CRS和NEs之间的相关性分析

多种血清生物标志物[如IL-15、IL-6、铁蛋白、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、趋化因子CXC配体10（CXCL10）与干扰素γ（IFNγ）]的峰值（和/或AUC_0-28水平），均与≥3级CRS或NEs相关。在部分患者中，血清生物标志物[如细胞间黏附分子-1（ICAM-1）与血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）]的峰值水平较基线升高≥2倍，与≥3级不良事件的发生相关。在基线与第0天，肿瘤坏死因子α（TNFα）与INTL2R/CD25水平升高也与较高级别的CRS与NEs发生相关。

与此同时，与疗效存在相关性的血清生物标志物较少，IL-10、IL-5与IL-15水平与疗效（如ORR、完全缓解、持续缓解、EFS和PFS）呈正相关，而IL-7、IL-12p40与巨噬细胞炎性蛋白1B（MIP-1B）与疗效呈负相关。在基线（可选桥接之前的时间点，仅限于糖皮质激素）与第0天（清淋预处理后Axi-cel回输前的时间点），TNFα、MIP-1A、颗粒酶B、MIP-1B、INTL2R/CD25与IL-7水平的升高与疗效降低相关。

此外，在基线及回输后的时间点，较高水平的血清炎症生物标志物与分化程度较高的T细胞，如T_CM表型（CCR7⁺ CD45RA^– T细胞）或T_EM+T_EFF表型（CCR7^–T细胞）百分比相关，而初始T细胞表型与许多毒性相关的血清生物标志物呈负相关。

单采血T细胞属性与Axi-cel产品中免疫T细胞亚群之间的相关性

单采中的T细胞表型与Axi-cel产品中的免疫T细胞亚群密切相关（图9a-d）。富含 CD27⁺ CD28⁺ CD8⁺初始T细胞与客观缓解（p=0.0369）与PFS（p=0.0345）相关，但与CRS（p=0.9619）或NEs（p=0.1319）无关。与ZUMA-1研究相比（n=100），ZUMA-7研究中（n=137）单采血细胞中CD27⁺ CD28⁺初始T细胞亚群百分比更高，表明在早线治疗中更有可能获得更具干细胞样表型的T细胞产物。

在LBCL二线治疗中，Axi-cel的疗效与安全性与其产品属性相关。CAR-T细胞扩增峰值与临床缓解和不良事件之间具有相关性。Axi-cel的血清药效学特征与其疗效和不良事件相关。单采血和最终CAR-T产品中表达CD27和CD28的初始T细胞表型（CCR7⁺ CD45RA⁺）与更好的疗效、更低的毒性和更早线治疗相关。上述结果支持CAR-T细胞疗法在LBCL患者中早线更获益的观点。

参考文献：

[1].Locke FL, et al. N Engl J Med. 2022;386(7):640-654.

[2].Locke FL, et al. Lancet Oncol. 2019;20:31–42.

[3].Filosto S, et al. Blood Cancer Discov. 2024;5(1):21-33.